RFLP: Definição e seus usos na resolução de mistérios de DNA

O Polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição (RFLP) é um método molecular de análise genética que permite que os indivíduos sejam identificados com base em padrões únicos de corte de enzimas de restrição em regiões específicas de DNA.

Também referida como Análise de RFLP, a técnica aproveita os polimorfismos nos códigos genéticos das pessoas individuais. Mesmo que todos os membros de uma espécie tenham essencialmente a mesma composição genética, essas pequenas diferenças representam variações no fenótipo, como aparência ou metabolismo, entre indivíduos.

RFLP: técnica de análise e aplicações

A técnica de análise de RFLP envolve o corte de uma região particular de DNA com variabilidade conhecida, com enzimas de restrição, separando os fragmentos de DNA por eletroforese em gel de agarose e determinando o número de fragmentos e tamanhos relativos.

Uma enzima de restrição é uma enzima, uma molécula de proteína, que corta o DNA em locais de restrição. Em essência, a amostra de DNA é quebrada e digerida pelas enzimas de restrição. Os fragmentos resultantes são separados de acordo com os seus comprimentos e o padrão de tamanhos de fragmentos será diferente para cada indivíduo testado.

O processo RFLP completo requer marcação de sonda, fragmentação de DNA, eletroforese, mancha, hibridação, lavagem e autorradiografia. O RFLP detectado é visualizado usando filme de raios-X em uma autorradiografia, onde os fragmentos de DNA podem ser vistos e analisados ​​após serem separados uns dos outros por eletroforese.

Algumas das aplicações para análise RFLP incluem:

• impressão digital de DNA . Os cientistas forenses podem usar análise de RFLP para identificar suspeitos com base em amostras de evidências coletadas em cenas de crimes.
• Paternidade. RFLP também é usado na determinação de paternidade ou para rastrear ancestrais.
• Diversidade genética. A técnica pode ser utilizada no estudo da evolução e migração da vida selvagem, no estudo dos padrões de reprodução nas populações animais e na detecção e diagnóstico de certas doenças.

A técnica de utilização da detecção RFLP de variação nos genomas é uma ferramenta vital no mapeamento do genoma e na análise de doenças genéticas.

Se a localização de um gene de doença particular for buscada em um certo cromossomo, então os pesquisadores analisariam o DNA dos membros de uma família com a doença e, em seguida, buscam padrões similares de herança em alelos de RFLP. Uma vez que um gene da doença é localizado, a realização de análises de RFLP em outros membros da família pode revelar um portador dos genes mutantes ou o risco total de sinal de doença.

É importante notar que a técnica RFLP não é amplamente utilizada agora que técnicas mais novas e mais robustas são usadas para análise de DNA em ciência forense e vários outros campos.

Aspecto Negativo da Análise

Infelizmente, a técnica de análise RFLP é tediosa e lenta. Além de exigir uma grande quantidade de amostra de DNA, a amostra geralmente precisa ser do tamanho de um quarto, o que é relativamente grande para as amostras de DNA - o processo, desde a rotulação da sonda até a lavagem e a autorradiografia, pode levar até um mês inteiro para completar.

Os resultados do Projeto Genoma Humano bastante substituíram a necessidade de RFLP. O projeto permitiu determinar toda a sequência do DNA encontrado em células humanas, o genoma humano e para identificar todos os genes no genoma humano.