Como fazer salina tamponada com fosfato (PBS)

PBS (solução salina tamponada com fosfato) é um tampão comumente usado para coloração imuno-histoquímica e é comumente usado na pesquisa biológica. A osmolaridade e as concentrações de íons das soluções combinam as do corpo humano (isotônico).

PBS é uma solução salina à base de água contendo hidrogenofosfato de sódio, cloreto de sódio e, em alguns casos, cloreto de potássio e di-hidrogenofosfato de potássio.

Coloração imunofluorescente para IHC

A coloração imunofluorescente foi o primeiro método de coloração imuno-histoquímica (IHC). Com a fundamentalidade da reação de ligação ao antígeno-anticorpo, os antígenos tornam-se visíveis usando corantes de fluorescência quando conjugados com anticorpos. O processo acontece quando ativado pela excitante luz de um comprimento de onda específico sob um microscópio fluorescente. A imuno-histoquímica refere-se ao processo de detecção de antígenos (por exemplo, proteínas) nas células de uma seção de tecido usando o princípio de anticorpos que se ligam especificamente a antígenos em tecidos biológicos.

Usos de salina tamponada com fosfato (PBS)

A solução salina tamponada com fosfato tem muitos usos porque é isotônica e não tóxica para a maioria das células. Ele pode ser usado para diluir substâncias e é usado para enxaguar contêineres contendo células. PBS pode ser usado como diluente em métodos para secar biomoléculas porque as moléculas de água dentro dela serão estruturadas em torno da substância (proteína, por exemplo) para serem "secas" e imobilizadas em uma superfície sólida.

A película fina de água que se liga à substância evita a desnaturação ou outras mudanças conformacionais. Os tampões de carbonato podem ser utilizados para o mesmo propósito, mas com menor eficácia. O PBS também pode ser usado para tomar um espectro de referência ao medir a adsorção de proteína na elipsometria.

Preparação de PBS

Existem muitas maneiras diferentes de preparar PBS.

Algumas fórmulas não contêm potássio, enquanto outras contêm cálcio ou magnésio. A receita de buffer abaixo, que é relativamente fácil, é para solução de reserva de 10X PBS (0. 1M). Também é fornecida uma opção para adicionar Tween. Todo o processo demora cerca de 10 minutos.

Como fazer salina tamponada com fosfato (PBS)

1. Pesar o seguinte: 10. 9 g de fosfato de sódio anidro dibásico (Na2HPO4), 3. 2 g de fosfato de sódio anidro monobásico (NaH2PO4) e 90 g de cloreto de sódio (NaCl).
2. Dissolver todos os itens acima em menos de 1L de água destilada.
3. Ajuste o pH para 7. 4.
4. Faça a solução até um volume final de 1L.
5. (opcional) Para uma solução contendo 0. 5% de Tween 20, adicione 5 mL de Tween 20 à solução 1L.
6. Diluir 10X antes do uso e reajustar o pH, se necessário.

Dicas para fazer o tampão PBS

• Armazenar à temperatura ambiente.
• Os reagentes não anidros podem ser substituídos, mas você precisará recalcular a massa adequada de cada um para acomodar as moléculas de água adicionadas.

O que você precisa fazer PBS Buffer

• Fosfato de sódio monobásico (anidro)
• Fosfato de sódio dibásico (anidro)
• Cloreto de sódio
• Barcos de escala e pesagem
• Agitador magnético e barra de agitação > Sonda de pH, calibrada e soluções adequadas para o ajuste de pH
• balão volumétrico de 1L
• Tween 20 (opcional)