Vídeo: Tampão fosfato 2026
O que torna os buffers de fosfato destacados? Em primeiro lugar, porque contém três prótons ácidos, o ácido fosfórico tem constantes de dissociação múltiplas e pode ser usado para criar tampões para qualquer um dos três pHs correspondentes.
Os três valores de pKa para o ácido fosfórico (do Manual de Química e Física da CRC) são 2. 16, 7. 21 e 12. 32. O fosfato monossódico e sua base conjugada, fosfato dissódico são usualmente utilizados para gerar tampões de pH valores em torno de 7, para aplicações biológicas, como mostrado aqui.
Fazer este buffer é um pouco mais difícil do que fazer tampões TAE e TBE. No entanto, não é extremamente difícil. Simplesmente média. Deve demorar cerca de 10 minutos para acelerar este buffer. Veja como.
1. Decidir sobre as propriedades do buffer
Antes de fazer um buffer, você deve primeiro saber qual molaridade deseja, o volume a ser e o pH desejado. A maioria dos buffers funciona melhor em concentrações entre 0. 1 M e 10 M. O pH deve estar dentro de 1 unidade de pH do ácido / base conjugada pKa. Por simplicidade, este cálculo de amostra será para 1 litro de buffer.
2. Determine a Razão de Ácido para Base
Use a equação de Henderson-Hasselbalch (abaixo) para determinar a relação entre o ácido e a base para fazer um tampão do pH desejado. Use o valor pKa mais próximo do seu pH desejado e a proporção se referirá ao par conjugado ácido-base que corresponde a esse pKa.
HH Equação: pH = pKa + log ([Base] / [Ácido])
Para um tampão de pH 6. 9, [Base] / [Ácido] = 0. 4898
Substituir por [Ácido] e Resolver para [Base]
A molaridade desejada do buffer é a soma de [Ácido] + [Base].
Para um buffer de 1 M, [Base] + [Ácido] = 1 e [Base] = 1 - [Ácido]
Ao substituir isso na equação de razão, da etapa 2, você obtém: < [Ácido] = 0. 6712 moles / L
Resolva para [Ácido]
Usando a equação: [Base] = 1 - [Ácido], você pode calcular isso:
[Base] = 0 3288 moles / L
3. Misture a base de ácido e conjugação
Depois de usar a equação de Henderson-Hasselbalch para calcular a proporção de ácido a base para o seu amortecedor, prepare apenas menos de 1 litro de solução usando as quantidades corretas de fosfato monossódico e fosfato dissódico .
4. Verifique o pH
Use uma sonda de pH para confirmar que o pH correto para o buffer é atingido. Ajuste ligeiramente, conforme necessário, usando ácido fosfórico ou hidróxido de sódio (NaOH).
5. Corrija o volume
Quando o pH desejado for atingido, coloque o volume de buffer em 1 litro. Em seguida, diluir o buffer conforme desejado. Este mesmo buffer pode ser diluído para criar buffers de 0. 5 M, 0. 1 M, 0. 05 M ou qualquer coisa intermediária.
6. Dicas para o Buffer
Lembre-se de que o pKa não é facilmente medido com um valor exato.Valores ligeiramente diferentes podem estar disponíveis na literatura de diferentes fontes.
7. O que você precisa
Para fazer o buffer, você precisará de três substâncias, enquanto os materiais restantes são equipamentos. As substâncias são fosfato monossódico, fosfato dissódico e ácido fosfórico ou hidróxido de sódio para ajustar o pH.
Você também precisará de um medidor de pH e sonda e laboratório apropriado. Isso inclui um balão volumétrico, cilindros graduados, copos e barras de agitação.
Por fim, você precisará de uma placa quente agitadora.
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