Vídeo: Preparing Tris Buffer 2026
O tampão TAE é uma solução composta de base de Tris, ácido acético e EDTA (Tris-acetato-EDTA). É historicamente o tampão mais comum utilizado para a eletroforese em gel de agarose nas análises de produtos de DNA resultantes de amplificação por PCR, protocolos de purificação de DNA ou experiências de clonagem de DNA.
Este buffer possui pouca força iónica e baixa capacidade de buffer. É mais adequado para eletroforese de pedaços de DNA grandes (> 20 kb) e terá de ser substituído com frequência ou recirculado por tempos de funcionamento de gel mais longos (> 4 h).
Com isso em mente, você pode querer considerar vários lotes do buffer.
Dado que o buffer é fácil de fazer e as etapas podem ser realizadas rapidamente, fazer mais de um lote por vez não deve ser particularmente demorado ou difícil de retirar. Usando as instruções abaixo, deve demorar apenas 30 minutos para fazer o buffer TAE. Veja como:
Prepare uma Solução de Estoque de EDTA
Uma solução de EDTA (ácido etilenodiamina tetraacetic) é preparada antes do tempo. O EDTA não irá completamente em uma solução até que o pH seja ajustado para cerca de 8. 0. Para uma solução de reserva de 500 mililitros de 0,5 M de EDTA, pesar 93. 05 gramas de sal dissódico de EDTA (FW = 372. 2 ). Dissolver em 400 ml de água desionizada e ajustar o pH com hidróxido de sódio (NaOH). Complete a solução para um volume final de 500 mililitros.
Whip Up a Stock Solution of TAE
Faça uma solução de estoque concentrada (50x) de TAE pesando 242 gramas de base de Tris (FW = 121. 14) e dissolvendo-a em aproximadamente 750 mililitros de água desionizada.
Adicione cuidadosamente 57. 1 mililitros de ácido glacial e 100 mililitros de 0.5 M EDTA (pH 8. 0). Depois disso, ajuste a solução para um volume final de 1 litro. Esta solução de estoque pode ser armazenada à temperatura ambiente. O pH deste buffer não é ajustado e deve ser cerca de 8. 5.
Preparar uma Solução de Trabalho de TAE
A solução de trabalho de 1x TAE buffer é feita simplesmente diluindo a solução de reserva por 50x em água desionizada.
As concentrações finais de soluto são 40 mM. Acetato de tris e EDTA 1 mM. O buffer já está pronto para uso na execução de um gel de agarose.
O que você precisa para o buffer
Uma vez que fazer o buffer TAE requer apenas um conjunto rápido e simples de instruções, a quantidade de materiais necessários para isso não é excessiva. Você precisará apenas de sal dissódico de EDTA, base de Tris e ácido acético glacial.
Fazer o buffer também requer um medidor de pH e padrões de calibração, conforme apropriado. Você também precisará de 600 mililitros e 1500 mililitros de taças ou frascos, bem como cilindros graduados. Finalmente, você precisará de água desionizada, barras de agitação e placas de agitação.
Embrulho
Onde você planeja fazer o buffer - em um site da escola, um local de trabalho ou outro local, como sua casa?Verifique o inventário antes de começar a certificar-se de ter todos os materiais acima para o buffer TAE.
Se preferir não ter que pagar por materiais, é recomendável que o buffer fora da sua casa seja recomendado. Você pode facilmente solicitar os materiais que você precisa on-line ou visitar uma loja especializada para eles.
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