Como fazer TBE Buffer em 3 etapas fáceis

O tampão TBE é uma solução tampão composta de base Tris, ácido bórico e EDTA (ou Tris-borato-EDTA em conjunto). Este tampão é freqüentemente usado para eletroforese em gel de agarose na análise de produtos de DNA resultantes de amplificação por PCR, protocolos de purificação de DNA ou experiências de clonagem de DNA.

O tampão TBE é particularmente útil para a separação de fragmentos de ADN menores (MW <1000), tais como pequenos produtos de digestão de enzimas de restrição.

O TBE possui uma maior capacidade de buffer e dará uma resolução mais nítida do que o buffer TAE. O tampão TAE é uma solução composta de base de Tris, ácido acético e EDTA (Tris-acetato-EDTA).

O TBE é geralmente mais caro do que o TAE e inibe a ligase de DNA, o que pode causar problemas se a posterior filtração de DNA e as etapas de ligação forem destinadas. Com os três passos simples a seguir, saiba como fazer o buffer TBE. Não deve demorar mais do que 30 minutos para criar este buffer. Veja como:

Prepare uma Solução de Estoque de EDTA

Uma solução de EDTA (ácido etilenodiamina tetraacética) deve ser preparada antes do tempo. O EDTA não entrará completamente em solução até o pH ser ajustado para cerca de 8. 0. Para uma solução de reserva de 500 mililitros de 0,5 M de EDTA, pesar 93. 05 gramas de sal dissódico de EDTA (FW = 372. 2). Em seguida, dissolva-o em 400 ml de água desionizada e ajuste o pH com NaOH. Depois disso, complete a solução para um volume final de 500 mililitros.

Prepare uma solução de reserva de TBE

Faça uma solução de reserva concentrada (5x) de TBE pesando 54 g de base de Tris (FW = 121. 14) e 27. 5 g de ácido bórico (FW = 61. 83) e dissolvendo ambos em aproximadamente 900 mililitros de água desionizada. Em seguida, adicione 20 mililitros de 0,5 M EDTA (pH 8,0) e ajuste a solução para um volume final de 1 litro.

Esta solução pode ser armazenada à temperatura ambiente, mas um precipitado irá formar em soluções antigas. Armazene o tampão em garrafas de vidro e descarte se um precipitado se formou.

Preparar uma solução de trabalho de TBE

Para a eletroforese em gel de agarose, um tampão TBE pode ser utilizado a uma concentração de 0. 5x (diluição 1: 10 do estoque concentrado). Diluir a solução de reserva por 10x em água desionizada. As concentrações finais de soluto são Tris-borato 45 mM e EDTA 1 mM. O buffer já está pronto para uso na execução de um gel de agarose.

O que você precisa

Para fazer o buffer TBE, você precisará apenas de quatro substâncias. Os itens restantes nesta lista são equipamentos. As quatro substâncias necessárias são o sal dissódico de EDTA, base de Tris, ácido bórico e água desionizada.

Quanto ao equipamento, você precisará de um medidor de pH e padrões de calibração, conforme apropriado. Além disso, você precisará de 600 mililitros e 1500 mililitros de taças ou frascos. Completando suas necessidades de equipamentos são cilindros graduados e barras de agitação e placas de agitação.

Verifique o inventário no laboratório que você estará usando para garantir que você tenha tudo o que precisa antes de começar. Nada é pior do que ter que parar no meio de preparar uma solução porque você acabou os materiais adequados.

Se o seu laboratório estiver na escola ou no seu local de trabalho, verifique com o pessoal adequado para ver se eles têm todos os itens no estoque. Fazer isso pode economizar tempo e energia no final.