Importância da atividade específica na atividade específica de isolamento proteico

A atividade específica é um termo usado para medir a taxa de reação de uma enzima com um substrato.

A atividade enzimática específica (atividade específica para baixo) é uma medida da pureza da enzima e citada como unidades / mg . O valor torna-se maior à medida que uma preparação enzimática se torna mais pura, uma vez que a quantidade de proteína (mg) é geralmente menor, mas a taxa de reação permanece a mesma (ou pode aumentar devido a interferência reduzida ou remoção de inibidores).

Atividade específica: medição da enzima cinética

Como um pouco de fundo, as enzimas são proteínas que atuam como catalisadores na redução da quantidade de energia de ativação para uma reação ocorrer. A energia de ativação é a energia necessária para que as reações sejam "iniciadas", pois muitas reações não ocorrem muito rapidamente (ou ocorrem) se forem termodinamicamente possíveis.

As enzimas catalisam reações específicas em um site particular (conhecido como o site ativo) onde os reagentes se ligam e reagem para gerar os produtos. Os substratos possuem sites ativos que são específicos apenas para eles, de modo que nenhuma outra substância se liga ou reaja no mesmo site. Como um bloqueio e chave, cada enzima irá catalisar apenas uma reação específica (com algumas exceções).

A atividade específica é usada em métodos de isolação de proteínas para indicar a porcentagem de purificação. É importante conhecer esta unidade ao comprar enzimas para indicar exatamente quanto da enzima pura você está recebendo.

Quando mede a cinética enzimática (a taxa de reação de uma enzima com um substrato - ou superfície), a atividade específica é definida como a quantidade de substrato que a enzima converte (reações catalisadas), por mg de proteína na preparação enzimática, por unidade de tempo.

Um exemplo de atividade específica seria:

A atividade específica da enzima isolada foi medida a 150 umoles / min / mg de proteína antes da purificação e 800 umoles / min / mg, após purificação.

A atividade específica é uma medida importante da pureza da enzima. Diferentes lotes de uma enzima pura devem ter os mesmos valores e até mesmo diluir uma solução enzimática muitas vezes terão valores de atividade específicos idênticos, embora haja diferentes valores de atividade enzimática. Isso ocorre porque ao calcular a atividade específica, o numerador (unidades / ml) e o denominador (mg / ml) são afetados igualmente.

• A atividade específica é muito diferente da atividade, mas o cálculo da atividade específica ainda depende do valor da atividade. Isso significa que o valor de atividade específico indicado também dependerá da definição da unidade enzimática.

Os lotes de enzimas com valor de atividade específico inferior ao esperado podem conter moléculas enzimáticas que se tornaram alteradas ou misturadas com impurezas.

Fatores que afetam a atividade enzimática

É possível que uma enzima possa ter valores de atividade medidos diferentes quando medidas em laboratórios diferentes (ou seja, diferenças reais na atividade medida, diferenças não aparentes causadas pelo uso de diferentes definições de unidade).

A forma como um ensaio é realizado (o método de teste para determinar a pureza das enzimas) influenciará os valores de atividade relatados. Por exemplo, as enzimas geralmente são mais ativas entre temperaturas de 37 graus Celsius em comparação com 20 graus Celsius, portanto, se um ensaio for realizado a 21 graus Celsius, os valores serão diferentes dos ensaios realizados a uma temperatura de 32 graus Celsius (tipicamente , os ensaios são realizados a uma temperatura entre 20-37 graus Celsius).

Assim, a definição da unidade enzimática seria melhor expressa como: 1 unidade (U) é a quantidade de enzima que catalisa a reação de 1 nmol de substrato por minuto em condições padrão.