Como congelar-secar uma cultura bacteriana (Lyophilization)

A liofilização, também chamada de liofilização ou criodesicação, é o processo de remoção de água de um produto depois de congelado (e depois colocado sob vácuo) permitindo que o gelo mude de um sólido para um vapor, sem passar por uma fase líquida. O gelo (ou outros solventes congelados) são removidos de um produto através do processo de sublimação e as moléculas de água ligadas são removidas através do processo de dessorção.

O básico da liofilização

Uma das melhores maneiras de armazenar uma cultura de bactérias, fungos, leveduras ou outros microorganismos por longos períodos de tempo é usar o processo de liofilização. Este breve procedimento de laboratório pode ser realizado com qualquer congelador-secador comercialmente disponível que preservará sua coleção de cultura. Como a liofilização é a forma mais complexa e dispendiosa de secagem, o processo é geralmente restrito a materiais delicados e sensíveis ao calor de alto valor. Substâncias que não são danificadas pelo congelamento geralmente podem ser liofilizadas para que o armazenamento refrigerado seja desnecessário.

Este processo pode demorar apenas três horas e até 24 horas, sem incluir o tempo de crescimento da cultura.

O processo passo a passo de liofilização

1. Primeiro, cultivar uma cultura durante a noite, ou gramado, do microorganismo em LB ou outra placa de agar nutritivo apropriada.

2. Em seguida, prepare os frascos de frasco estéril por autoclave antes do tempo, com as tampas (rolhas de borracha) colocadas frouxamente na parte superior. Coloque etiquetas de papel impressas com a identificação da cultura dentro dos tubos antes do autoclave. Alternativamente, use tubos com tampas projetadas para esterilidade.

3. Adicionar 4 mL de tampão de liofilização à placa. Se necessário, as células podem ser suspensas usando uma haste de vidro estéril.

4. Transfira rapidamente a suspensão de cultura para os frascos esterilizados. Adicione aproximadamente 1. 5 mL por frasco para injectáveis. Selar com a tampa de borracha.

5. Congele a suspensão de cultura dentro dos frascos colocando os frascos em um congelador de -20 graus Celsius.

6. Uma vez que as culturas estão congeladas, prepare o liofilizador, ligando-o e permitindo a estabilização da temperatura apropriada e das condições de vácuo. Faça isso de acordo com as instruções do fabricante para a marca particular de congelador que você está usando.

7. Cuidadosamente e assépticamente, coloque os tampões do frasco suavemente sobre os frascos, de modo que a umidade possa escapar durante o processo de liofilização e coloque os frascos em uma câmara de congelação. Aplique o vácuo na câmara de acordo com as instruções do fabricante.

8. Permitir que o tempo de cultura seja completamente liofilizado (secar). Isso pode demorar de algumas horas até a noite dependendo do volume de cada amostra e quantas amostras você tem.

9. Remova as amostras da câmara do congelador-secador de acordo com as instruções do fabricante e feche imediatamente os frascos com as tampas de borracha e, em seguida, as tampas de crimpagem.

10. Armazene a coleção de cultura liofilizada à temperatura ambiente.

Produtos que você precisa

• Freeze-secador
• Nutriente ou outras placas apropriadas de ágar (e incubadora para cultivo)
• Vara de vidro
• Tampão de liofilização
• Frascos de crimpagem com rolhas de borracha (e um crimper para aplicar as tampas)
• Freezer

_{Referência:
SP Scientific. Princípios básicos de liofilização. // www. spscientific. com / liofilização-liofilização noções básicas /}